PCR實驗室咨詢定制
要完成一組PCR實驗,通常需要經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產物分析4個實驗過程。
這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置,組成一個獨立的PCR實驗區(qū)。標準的PCR實驗區(qū)包括:試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。
PCR實驗室整體平面布局某醫(yī)院PCR實驗室平面布局如圖1所示,整個區(qū)域有一個公用走廊,每個獨立實驗區(qū)設有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染,并且降低擴增產物對人員和環(huán)境的污染。
試劑準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。
試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。
試劑準備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。
房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài),以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染。
標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。
標本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計算冷負荷時,需要將它們計算在內。在標本制備區(qū),還需要配備生物安全柜,用于進行提取核酸的操作。
為避免提取的核酸在柜內反復循環(huán),造成標本之間的交叉污染,出現(xiàn)假陽性結果,該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室,排風經過高效過濾器過濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實驗室中。
根據經驗,如果實驗室內配備生物安全柜,每配備一臺,實驗室的面積增加10m2;標本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。