PCR實驗室核酸污染
PCR實驗室核酸污染傳統(tǒng)處理方法:
1. 物理方法
使用紫外燈照射是目前PCR實驗室預(yù)防污染最常規(guī)的方法。由于DNA鏈上相鄰的嘧啶在254nm紫外誘導(dǎo)下發(fā)生交聯(lián),嘧啶二聚體不能被切除,導(dǎo)致DNA聚合酶在空間上被阻礙或者DNA不能被完全變性,從而使擴增反應(yīng)終止。由于小的擴增子只有較少的臨近嘧啶,所以該方法對小的擴增子效果不明顯,對富含G+C的和短的(<300bp)的擴增產(chǎn)物污染效果不大。
2. 化學(xué)方法
包括使用商品化的DNA去除劑、次氯酸鈉、1mol/L的鹽酸等各種化學(xué)物質(zhì)去降解DNA?;瘜W(xué)方法主要通過氧化損傷核酸的作用,從而使留在實驗室的擴增產(chǎn)物被破壞掉。
3. 順其自然法
停下所有實驗,靠通風(fēng)和時間抹掉核酸的痕跡。
4. 絕地求生法
換一種試劑盒,只要兩種試劑的擴增產(chǎn)物不一致,沒有交叉反應(yīng),可以繼續(xù)做實驗。