1970-01-01
微生物實驗室設計包括以下幾個方面:人員,培養(yǎng)基,菌種,設備,實驗室的布局和運行,器具及工作服洗滌、存放要求,更衣流程。
1.?人員從事微生物實驗工作的人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。檢驗人員數(shù)量和素質應能滿足檢驗工作的需要。檢驗人員必須熟悉相關檢測方法、程序、檢測目的和結果評價。保證人員在上崗前接受勝任工作 所必須的設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等方面的培訓,經(jīng)考核合格后方可上崗。
2.?培養(yǎng)基培養(yǎng)基質量穩(wěn)定可靠,有良好的促菌生長能力,具備適宜的滅菌方式,在規(guī)定的條件和環(huán)境下貯藏,通過不同菌種的接種試驗并觀察生長狀態(tài),進行靈敏度試驗。
3.?菌種標準菌株的復活和傳代應當滿足藥典要求。試驗過程中,生物樣本是最敏感的,它們的活性依賴于合適的試驗操作和存儲條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化,盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。工作 菌株的傳代次數(shù)應當嚴格控制,不得超過5代(從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代),防止過度的傳代增加菌種變異的風險。
4.?設備完成相應的檢定、校準、驗證、確認其性能。對于一些容易造成微生物污染的儀器設備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應定期清潔和消毒。
5.?無菌檢查室如果企業(yè)標準引用藥典要求,企業(yè)應當按照2010版藥典中(附錄ⅪH)無菌檢查法要求設置潔凈間,無菌檢查應在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空區(qū)域內或隔離系統(tǒng)中進行,其全部過程應當嚴格遵 守無菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不得影響供試品微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。如企 業(yè)標準中引用的GB/T14233.2的無菌試驗方法,還應滿足以下要求:無菌室操作臺或超凈工作臺局部應符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后,應檢查空氣中的菌落數(shù),方法如下:取直徑約90mm培養(yǎng) 皿,無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL,在30C~35C培養(yǎng)48h證明無菌后,取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋,暴露30?min后蓋好置30?C~35?C培養(yǎng)48h后取出檢查。3只培養(yǎng)皿上生長的菌落 數(shù)平均應不超過1個。
6.?微生物限度檢查室微生物限度檢查法(附錄ⅪJ)應在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內進行。檢驗室單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。
7.?陽性對照(接種)室微生物檢驗需要對標準菌種、檢測菌種進行各種操作。如用于培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查和微生物限度檢查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微生物檢定時需要的菌種及菌懸液制備、傳代轉接種 。這些操作要處理微生物菌種,部分菌種為條件致病菌,特殊情況要用到病原菌。
如培養(yǎng)基靈敏度檢查和無菌檢查方法驗證試驗用到菌種為:金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。無抑菌作用供試品陽性對照試驗菌種為金黃色葡萄球菌,有抑菌作用供試品 對照試驗菌種為大腸埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌。(其實驗室安全級別見表1)雖然醫(yī)療器械陽性對照(接種)室設計沒有專門的國家或行業(yè)標準,但參考上述衛(wèi)生部文件要求,并根據(jù)《實驗室生物安全通用要求》GB19489– 2008規(guī)定,危害等級為Ⅱ定義為能引起人或動物發(fā)病,但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體,實驗室感染不導致嚴重疾病,具備有效治療和預防措施,并且傳播風險有限。對應危害等級 Ⅱ應采用BSL—2實驗室,并配備生物安全柜。
一般情況(對應大部分醫(yī)療器械品種):鑒于常規(guī)陽性對照(接種),部分種類菌種在人體抵抗力低下(非健康狀態(tài))時有致病性,微生物實驗室有一定的生物安全風險,建議有條件的企業(yè)盡可能使用生物安全柜,避免對操作者造成危害。特殊情況(對應少部分醫(yī)療器械品種):屬于如下情況時應遵循不低于BSL–2實驗室設置,須有相應級別生物安全柜:
(1)某些含藥類醫(yī)療器械,尤其是具有抗菌、抑菌功能的,其陽性對照(試驗)操作可能產(chǎn)生耐藥性菌種的;
(2)對含藥(尤其是抗生素)類醫(yī)療器械滅菌能力進行效能驗證需致病性、感染性菌株的;
(3)陽性對照(試驗)菌種操作中有噴灑、溢出、甩濺可能的。容易產(chǎn)生氣溶膠的行為(對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時,將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時,在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細胞培養(yǎng)瓶) 。對陽性對照(試驗)室環(huán)境背景,藥典未作具體規(guī)定。參考《生物安全實驗室建筑規(guī)范》,二級生物安全實驗室可不設空調凈化系統(tǒng),也可根據(jù)需要設置帶循環(huán)回風的空調凈化系統(tǒng)。但為了保護實驗環(huán)境,延長生物安全柜的 使用壽命,建議采用機械通風,并加裝過濾裝置。排風應經(jīng)過處理后直排。陽性對照室應保持相對負壓,這里需要強調的是“相對”二字,如陽性間相對臨室為負壓,但對大氣可能實為正壓或負壓。在正壓的情況下,與非潔 凈區(qū)或室外大氣間的靜壓差不宜過大,以避免陽性間密閉性意外遭破壞時污染物迅速擴散。
8.?培養(yǎng)室用于放置微生物生長的細菌培養(yǎng)箱、真菌培養(yǎng)箱和菌種保存的冰箱。室內應保持清潔,不得堆放雜物。大多數(shù)企業(yè)將其設置為一般環(huán)境,但應保持潔凈,注意避免使用強效、揮發(fā)性、噴霧型的消毒劑,防止影響微生物的生長。