對于實(shí)驗(yàn)室有所了解的人相信大家都知道，PCR實(shí)驗(yàn)室最主要的還是各房間的氣流壓差控制，特別是擴(kuò)增和產(chǎn)物區(qū)的氣流是不能相互串通的，以免引起交叉污染，檢測提取數(shù)據(jù)重疊失效等。(對于房間的潔凈度要求可以定位準(zhǔn)潔凈室標(biāo)準(zhǔn)和十萬級標(biāo)準(zhǔn)即可);所以根據(jù)PCR操作流程方向，試劑準(zhǔn)備，標(biāo)準(zhǔn)制備，擴(kuò)增區(qū)，產(chǎn)物分析區(qū)。相對壓差也應(yīng)從試劑 準(zhǔn)備至產(chǎn)物分析方向由高到低的過程。不過在實(shí)際的使用調(diào)劑過程中我們會遇到緩沖的氣壓很難調(diào)到設(shè)定值，若擴(kuò)增和產(chǎn)物緩沖區(qū)的—5~—10Pa，在調(diào)試過程中會出現(xiàn)壓差不平衡的問題，比如潔走廊往緩沖方向流入緩沖就是小負(fù)壓室，緩沖再被動流入負(fù)壓內(nèi)室就應(yīng)變?yōu)檎龎?，從而緩沖間排風(fēng)大于送風(fēng)量，也就是送風(fēng)設(shè)置為關(guān)閉狀態(tài)后基本可以實(shí)現(xiàn)負(fù)壓的設(shè)定值，因此關(guān)閉送風(fēng)維持負(fù)壓狀態(tài)是不可行的。

其實(shí)我們只要了解PCR關(guān)鍵性能后也可以取另外的方式來實(shí)現(xiàn)氣流合理性的控制，比如PCR緩沖間理解為第二氣閥室(室內(nèi)與緩沖間是兩層隔離屏障，潔凈走廊對外是第一層屏障)，所以緩沖間的設(shè)置為相對或者絕對的正壓值是很有必要也是符合使用標(biāo)準(zhǔn)的。

對于無菌負(fù)壓潔凈間我們經(jīng)常會碰到塵埃粒子檢測不達(dá)標(biāo)的問題，本人經(jīng)過多次的現(xiàn)場考察和多年的檢測技術(shù)經(jīng)驗(yàn)可以得出以下兩個問題：塵埃粒子問題，房間的負(fù)壓設(shè)定值越高其潔凈難度也就會越高，對于我們施工的工藝要求也就越高，顧名思義負(fù)壓潔凈間的大氣壓要比室外空氣大氣壓力低，潔凈間根據(jù)要求設(shè)計(jì)負(fù)壓值越高，相對室外大氣壓值就會相差越大，如果施工工藝不到位就會導(dǎo)致負(fù)壓潔凈間的墻壁接縫，照明燈具電源線孔，吊頂板材開孔的高翔箱體縫隙，墻壁開孔的強(qiáng)弱電插座即插座孔等都是室外非經(jīng)過處理的氣壓空氣進(jìn)入負(fù)壓潔凈間的路徑，從而導(dǎo)致負(fù)壓潔凈間的塵埃粒子超標(biāo)的現(xiàn)象。

PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備:

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、混勻器等。

對于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。

2、樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、混勻器、水浴鍋等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

3、擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀、加樣器、消毒車。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。

4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有電泳儀、微波馬弗爐、加樣器、超凈工作臺、凝膠成像分析系統(tǒng)等。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。