細胞培養(yǎng)室的規(guī)劃

細胞培養(yǎng)是一種無菌技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響，細胞培養(yǎng)室要求環(huán)境清潔，空氣清新、干燥、無塵。

細胞培養(yǎng)實驗室由無菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、儲藏區(qū)、清洗和消毒滅菌區(qū)6部分組成，這些區(qū)域的共同特點是房間要寬敞、明亮，地面要便于清潔、防滑，墻壁的質(zhì)地光滑堅硬，儀器設(shè)備布局合理，方便操作，避免交叉干擾，陳設(shè)簡潔，便于清掃。

無菌操作區(qū)

無菌操作區(qū)是只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，較易造成污染。

因此，接種工作要在空氣經(jīng)過滅菌的環(huán)境里進行，小規(guī)模的無菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng)造，大規(guī)模的需建無菌室。

理想的無菌操作室應(yīng)劃為三部分：

a) 更衣室―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b) 緩沖間―位于更衣間與操作間之間，用于準備工作，還有防止污染的作用，以保證操作間的無菌環(huán)境，同時可放置恒溫培養(yǎng)箱以及必需的小型儀器。

c) 無菌操作間―無菌操作間則專用于無菌操作、細胞培養(yǎng)，其大小要適當，且其頂部不宜過高以保證紫外線的滅菌效果；墻壁光滑無死角以便清洗和消毒，無菌操作間容積小且為密閉式，一般無菌操作間的空氣消毒用紫外線燈，有的實驗室使用無臭氧紫外線消毒器或電子消毒滅菌器。

凈化工作臺：操作簡單，安裝方便，占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養(yǎng)室使用的凈化工作臺主要有兩種：a)側(cè)流式或稱垂直式 b)外流式或稱水平層流式。

孵育區(qū)

孵育區(qū)也稱培養(yǎng)區(qū)，本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴格，但仍需清潔無塵，因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行，后者費用高，一般實驗室多采用孵箱進行工作。

制備區(qū)

制備區(qū)主要進行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。應(yīng)設(shè)有試劑柜、器械柜、實驗臺和上水道、電源等，配備的主要儀器設(shè)備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養(yǎng)分裝器、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。

在有天平、pH計、磁力拌器等設(shè)備下完成制備以后，應(yīng)在無菌操作臺進行過濾除菌。液體制備直接關(guān)系組織細胞養(yǎng)的成敗，因此必須嚴格無菌操作。

儲藏區(qū)

儲藏區(qū)主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，此環(huán)境也需要清潔無塵。為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃。

細胞的凍存過程需要一系列程序降溫，一般為4 ℃下存放30min。轉(zhuǎn)放-20 ℃ 1 h，再轉(zhuǎn)入-80—-70℃過夜，之后才可以轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃)。因此儲存區(qū)必須配備冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱和液氮罐等設(shè)備。

清洗和消毒滅菌區(qū)

清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開，主要進行所有細胞培養(yǎng)器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作，應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌鍋、細菌過濾設(shè)備、電熱干燥箱、消毒柜、排風(fēng)設(shè)備等。

細胞實驗室的建設(shè)要求

1、環(huán)境要求

溫度：儀器還是操作對溫度沒有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26度。

濕度：過高的濕度會導(dǎo)致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。

潔凈度：細胞實驗對潔凈區(qū)并沒有要求，細胞實驗里面只有細胞操作的時候要求無菌的環(huán)境，這時要求有局部的百級，通常可以利用超凈臺或者生物安全柜來實現(xiàn)，不過有時候為了有個更好一點的環(huán)境，減小超凈臺過濾器更換的時間，會維持室內(nèi)的潔凈度，比如萬級的潔凈度。

無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。細胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境要求很高，在細胞操作時，一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進行。

在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導(dǎo)致細胞中毒死亡。

照明：滿足實驗用的操作照度，通常在300LUX。

2、圍護結(jié)構(gòu)要求

雖然實驗的操作對大環(huán)境沒有特殊要求，不過最好能有不產(chǎn)塵、不積塵的環(huán)境，能保證室內(nèi)的清潔，并且易于清洗、不容易滋生微生物，所以在選擇維護結(jié)構(gòu)時，選用彩鋼板、醫(yī)療板等潔凈板材是比較好的選擇，為了保證室內(nèi)的通透性，可以布置密閉窗。

3、消毒

通常做完實驗后，都需要做終末消毒，室內(nèi)需要安裝紫外燈，利用紫外燈對空氣和表面消毒。

細胞實驗室建設(shè)的注意事項

1、放置細胞培養(yǎng)的實驗室，空調(diào)需要能保證在冬季能制冷，特別是在密閉的環(huán)境里，培養(yǎng)箱等設(shè)備的散熱量會比較大，導(dǎo)致室內(nèi)溫度過高。

2、如果設(shè)計成凈化實驗室，就需要按凈化實驗室的要求去做，如果做的細胞涉及到生物安全，則必須按照生物安全實驗室去設(shè)計，具體根據(jù)所做實驗的種類，來確定實驗室的設(shè)計要求以及選擇的設(shè)備，是選擇超凈工作臺還是生物安全柜。

3、從事臨床細胞治療的，需要按照具體的規(guī)范要求建設(shè)。

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